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• 高品質なPML (precise mutagenesis library、 精密変異導入ライブラリ)とハイスループットスクリーニング
• 親和性の10倍改善を保証
親和性成熟（Affinity Maturation）は、抗体と抗原の結合速度論（バインディング・キネティクス）を改善し、医薬品の最適化に寄与することが知られています。従来広く用いられているNNK変異導入法（縮重プライマー：N = A/C/G/T, K = G/T）やファージライブラリには、変異の分布が均一でない、野生型配列の偏在、CDR（相補性決定領域）における飽和変異導入の範囲が限定的であるといった本質的な制約があります。これらの課題を克服するために、ProBioでは、変異導入のバイアスを最小限に抑えた高効率なPML（精密変異導入ライブラリ）技術と、ハイスループットFASEBA（発現・物理化学特性・親和性に基づく高速スクリーニング）という高効率スクリーニングプラットフォームを組み合わせたアプローチを採用しています。
110件以上のプロジェクト経験
精密なサイト飽和変異ライブラリ
10倍以上の親和性改善を保証
2024年1月までに
親和性成熟（Affinity Maturation、AM）の過程において、全CDR領域を網羅する飽和変異の理論的なライブラリサイズは20の60乗（20E60）にも達し、ディスプレイライブラリで構築することは極めて困難です。ProBioでは、各CDR内のごく少数の残基に飽和変異を限定するのではなく、より強力なツールを活用しています。これには、MOE（Molecular Operating Environment）を用いた構造モデリング、部位飽和変異ライブラリ（PML）、高効率なハイスループットFASEBA親和性スクリーニングプラットフォーム、2段階変異導入戦略、そしてBiacore 8Kを使用した表面プラズモン共鳴（SPR）解析プラットフォームが含まれており、各CDRにおけるあらゆる変異の可能性をカバーすることが可能です。
MOE（分子操作環境）は、統合型コンピュータ支援分子設計プラットフォームです。このソフトウェアは、RCSB/PDBデータベースや、輸送体ファミリー、GPCRファミリー、タンパク質キナーゼなど、十数種類の古典的なタンパク質ファミリー構造データベースと連携しています。構造モデリングと内部データベースを組み合わせることで、最適化のための潜在的な残基が特定され、抗体最適化のガイドとなります。
PMLは、部位飽和変異導入ライブラリー（site-saturation mutagenesis library）または飽和スキャン変異導入ライブラリー（saturation scanning mutagenesis library）です。各アミノ酸は、均等に分布するように他の18種のアミノ酸に変異されます。ProBioはこのPMLをスクリーニングすることで、3〜5箇所の変異ホットスポットを特定します。その後、これらのホットスポットを基に、組み合わせ変異ライブラリーを構築し、目的とする親和性を持つ最良の3〜5種類の組み合わせを見つけ出します。この手法は、スクリーニング効率を向上させ、高親和性の配列を取得できる確率を高めます。
飽和変異ライブラリの生成：同じ頻度と100％のカバレッジ
PMLは、変異の分布を制御するためにオンチップ合成オリゴを使用して作成されます。
NGSによる飽和変異ライブラリのシーケンシングで、変異の分布を検証します。
図。NGSにより、各CDR残基が他の18種類の残基（自己を除く）に同じ頻度で変異していることが明らかになりました。
従来のNNKライブラリとの比較
FASEBAは、親和性、発現レベル、および熱安定性の優れた候補を選択する特許取得済みの大腸菌（E. coli）ベースのシステムです。このプラットフォームは、実際にタンパク質を精製することなく、多数のタンパク質候補から最適な結合タンパク質を高効率で選択するために使用されます。
各飽和変異ライブラリーは、FASEBAの大腸菌ベースの発現システムに導入されます。
FA Fast
S Screening of
E Expression
B Biophysical-properties and
A Affinity
国際輸送にかかる時間については、プロジェクトディスカッションの際にプロジェクトマネージャーから提示されたスケジュールをご参照ください。
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